Жайкы илимий колдонмо: 40°C жылуулук толкуну молекулярдык эксперименттер менен кездешкенде

Акыркы убакта Кытайдын көпчүлүк бөлүгүндө жогорку температура сакталып калды. 24-июлда Шаньдун провинциясынын метеорологиялык обсерваториясы сары түстөгү жогорку температура боюнча эскертүү жарыялап, ички аймактарда кийинки төрт күн бою "саунага окшош" температура 35-37°C (111-133°F) жана нымдуулук 80% болот деп болжолдогон. Синьцзяндын Турпан сыяктуу жерлеринде температура 48°C (111-133°F) жакындап калды. Ухань жана Хубэйдин Сяоган шаарларында кызгылт сары түстөгү эскертүү жарыяланды, айрым жерлерде температура 37°Cден ашты. Бул аптаптуу ысыкта пипеткалардын бетинин астындагы микроскопиялык дүйнө адаттан тыш бузулууларды башынан кечирүүдө — нуклеин кислоталарынын туруктуулугу, ферменттердин активдүүлүгү жана реагенттердин физикалык абалы ысык толкуну менен акырын бурмаланып жатат.

Нуклеин кислотасын экстракциялоо убакыт менен жарышка айланды. Сырткы температура 40°C ашканда, ал тургай кондиционер күйүп турганда да, операциялык столдун температурасы көп учурда 28°C жогору болот. Бул учурда ачык жерде калган РНК үлгүлөрү жаз жана күз мезгилине караганда эки эседен ашык тез бузулат. Магниттик мончок экстракциясында эриткичтин тез учуп кетишинен улам буфердик эритме жергиликтүү түрдө каныккан болот жана кристаллдар оңой чөкмөгө түшөт. Бул кристаллдар нуклеин кислотасын кармоонун натыйжалуулугунда чоң өзгөрүүлөрдү жаратат. Органикалык эриткичтердин учуп кетиши бир эле учурда жогорулайт. 30°C температурада хлороформдун учуп кетишинин көлөмү 25°Cге салыштырмалуу 40% га көбөйөт. Иштөө учурунда түтүн капкагындагы шамалдын ылдамдыгы 0,5 м/с экенин камсыз кылуу жана коргоочу эффективдүүлүктү сактоо үчүн нитрил кол каптарын колдонуу зарыл.

ПТР эксперименттери андан да татаал температуралык бузулууларга туш болот. Taq ферменти жана тескери транскриптаза сыяктуу реагенттер температуранын кескин өзгөрүшүнө өтө сезгич. -20°C тоңдургучтан алынгандан кийин түтүктүн дубалдарындагы конденсация реакция системасына кирсе, ферменттин активдүүлүгүнүн 15% дан ашык жоголушуна алып келиши мүмкүн. dNTP эритмелери бөлмө температурасында (>30°C) 5 мүнөт болгондон кийин да аныкталуучу деградацияны көрсөтүшү мүмкүн. Аспаптын иштеши жогорку температурадан да кыйындайт. Лабораториянын айлана-чөйрөсүнүн температурасы >35°C болгондо жана ПТР аспабынын жылуулукту таркатуу аралыгы жетишсиз болгондо (дубалдан <50 см), ички температуранын айырмасы 0,8°C чейин жетиши мүмкүн. Бул четтөө 96 кудуктуу пластинанын четиндеги күчөтүү эффективдүүлүгүнүн 40% дан ашык төмөндөшүнө алып келиши мүмкүн. Чаң чыпкаларын үзгүлтүксүз тазалап туруу керек (чаңдын топтолушу жылуулукту таркатуу эффективдүүлүгүн 50% га төмөндөтөт) жана түз кондиционерлөөдөн алыс болуу керек. Андан тышкары, ПТР эксперименттерин түнкүсүн жүргүзгөндө, ПТР аспабын үлгүлөрдү сактоо үчүн "убактылуу муздаткыч" катары колдонуудан алыс болуңуз. 4°C температурада 2 сааттан ашык сактоо ысытылган капкак жабылгандан кийин конденсациянын пайда болушуна алып келиши мүмкүн, бул реакция системасын суюлтуп, аспаптын металл модулдарын дат басышы мүмкүн.

Жогорку температура боюнча эскертүүлөр тынымсыз болуп турганда, молекулярдык лабораториялар да коңгуроо кагышы керек. Баалуу РНК үлгүлөрү -80°C тоңдургучтун арткы жагында сакталышы керек, жогорку температура мезгилинде гана кирүүгө болот. -20°C тоңдургучтун эшигин күнүнө беш жолудан ашык ачуу температуранын өзгөрүшүн күчөтөт. Жогорку жылуулук чыгаруучу жабдуулар эки тараптан тең жана арткы тараптардан кеминде 50 см жылуулук бөлүп чыгаруу мейкиндигин талап кылат. Андан тышкары, эксперименталдык убакытты кайра түзүү сунушталат: РНКны бөлүп алуу жана qPCR жүктөө сыяктуу температурага сезгич операциялар үчүн 7:00-10:00; маалыматтарды талдоо сыяктуу эксперименталдык эмес иштер үчүн 13:00-16:00. Бул стратегия жогорку температура чокуларынын маанилүү кадамдарга тоскоол болушунун алдын алат.

Ысык толкун учурундагы молекулярдык эксперименттер техниканын да, чыдамкайлыктын да сыноосу болуп саналат. Жайкы тынымсыз күндүн астында, балким, пипеткаңызды коюп, аспап көбүрөөк жылуулукту чачыратып жибериши үчүн үлгүлөрүңүзгө кошумча муз куюуга убакыт келди. Температуранын өзгөрүшүнө болгон мындай урматтоо - бул жайдын аптаптуу айларында эң баалуу лабораториялык сапат - анткени, жайдын 40°C ысыгында молекулалар да кылдаттык менен корголгон "жасалма уюлдук аймакка" муктаж.