ПЦР анализаторунун көйгөйлөрүн чечүү: Көп берилүүчү суроолор жана чечимдер

Полимазанын чынжырына реакциясы (ПКО) Талдоочулар - молекулярдык биологиядагы маанилүү куралдар, изилдөөчүлөрдүн клиникалык диагностикасына генетикалык изилдөөлөргө дигордук тиркемелер үчүн ДНКны активдештирүүгө мүмкүндүк берет. Бирок, кандайдыр бир татаал түзмөккө окшоп, анын ишине таасир эткен көйгөйлөргө байланыштуу көйгөйлөргө туш болот. Бул макалада бир топ жалпы суроолор каралатPCR анализаторКыйынчылыктарды чечүү жана жалпы көйгөйлөрдү практикалык жол менен чечүү.

1. Эмне үчүн менин ПКОнун реакциясы күчөтпөйт?

Колдонуучулар кабыл алынган эң кеңири таралган көйгөйлөрдүн бири - ПЦРдин максаттуу ДНКны күчөтүү үчүн реакциясынын реакциясы. Муну бир нече факторго таандык болот:

Туура эмес праймер дизайн: Прайменттериңиз максаттуу ырааттуулук үчүн конкреттүү экендигин текшерип, оптималдуу эрүү температурасы (ТМ) оптималдуу болот. Эч нерсени билбестиктен баш тартуу үчүн пример дизайн үчүн программалык камсыздоо куралдарын колдонуңуз.

Шаблон ДНК жетишсиздиги: Сиз шаблон ДНКнын жетиштүү көлөмүн колдонуп жатканыңызды текшериңиз. Алсыз же амплитизацияга алып келбейт.

Тандалмадагы ингибиторлор: Үлгүдөгү булгоочу заттар ПКО реакциясын тоскоолдук кылат. ДНКны тазалоону же башка казып алуу ыкмасын колдонууну карап көрүңүз.

Чечим: Пример дизайныңызды текшериңиз, шаблон концентрациясын жогорулатып, сиздин үлгүңүз ингибиторлорду камтыбаңыз.

2. Эмне үчүн менин ПКОнун натыйжасы туура эмес өлчөмдө?

Эгерде сиздин PCRдин продукт өлчөмү күтүлгөндөй болбосо, анда колдонулган реакция шарттары же ингредиенттери менен көйгөйдү көрсөтүшү мүмкүн.

Өзгөчө эмес амплификация эмес: Эгерде праймер күтүлбөгөн сайтка ээ болсо, анда болушу мүмкүн. Жардыруу сыяктуу куралды колдонуп, праймердин өзгөчөлүгүн текшериңиз.

Туура эмес температура туура эмес температура: Эгерде анализ температура өтө төмөн болсо, анда конкреттүү милдеттүү эмес милдеттүү болбой калышы мүмкүн. Градиент посун менен анализдик температураны оптимизациялоо.

Чечим: PCR продукттун тактыгын жогорулатуу үчүн PRCR продукттарынын тактыгын жогорулатуу үчүн, температураны тастыктоо жана анализдик температураны оптималдаштыруу.

3 мен эмне кылышым керек?

ПЦРдагы анализатордогу ката жөнүндө кабарлар тынчсыздандырат, бирок алар көбүнчө мүмкүн болгон көйгөйлөрдү көп көрсөтө алышат.

Калибрлөө маселелери: ПКО анализаторунун туура калибрленгендигин текшериңиз. Такай техникалык тейлөө жана калибрлөө чектери так натыйжаларды алуу үчүн өтө маанилүү.

Программа тобу: Кээде программалык мүчүлүштүктөр көйгөйлөрдү жаратышы мүмкүн. Компьютериңизди өчүрүп күйгүзүңүз жана программалык камсыздоонун жаңыртууларын текшериңиз.

Чечим: Белгилүү бир ката коду үчүн колдонуучунун колдонмосуна кайрылыңыз жана сунушталган көйгөйлөрдү чечүү кадамдарын аткарыңыз. Үзгүлтүксүз тейлөө көптөгөн көйгөйлөрдүн алдын алат.

4. Эмне үчүн менин ПКО реакциямдын натыйжасы туура келбейт?

ПЦрдин натыйжасы бир нече себептерден улам көңүлү чөгүшү мүмкүн:

Регенттун сапаты: Бардык реагенттердин, анын ичинде ферменттерди, буферлерди жана ден-соолукту, анын ичинде жаңы жана жогорку сапаттагы экендигин текшериңиз. Мөөнөтү өтүп кеткен же булганган реагенттер өзгөрүлүшү мүмкүн.

Жылуулук цикллер калибрлөө: ПКО процесстерине туура келбеген температура жөндөөлөрү таасир этиши мүмкүн. Жылуулук циклердин калибрлөөсүн үзгүлтүксүз текшерип туруңуз.

Чечим: Сапаттуу реагенттерди колдонуп, ырааттуу натыйжаларды камсыз кылуу үчүн жылуулук циклериңизди үзгүлтүксүз колдонуңуз.

5. ПКОнун реакциянын натыйжалуулугун кантип жакшыртуу керек?

ПКОнун реакцияларынын натыйжалуулугун жогорулатуу, түшүмдүүлүккө жана ишенимдүү натыйжаларга алып келиши мүмкүн.

Реакциялоо шарттарын оптималдаштыруу: Праймердин, шаблон ДНК жана MGCL2 ар кандай концентрациясын колдонуп эксперимент. Ар бир ПКО реакциясы оптималдуу иштеши үчүн уникалдуу шарттар талап кылынышы мүмкүн.

Жогорку ишенимдүү ферменттерди колдонуңуз: Эгерде тактык чечүү керек болсо, Amplification учурунда каталарды азайтуу үчүн, жогорку ишенимдүү дна полимеразасын колдонуп көрүңүз.

Чечим: Өзүңүздүн ПКОңузду орнотуу үчүн эң жакшы шарттарды табуу үчүн оптимизация экспериментти жүргүзүү.

Кыскача

Кыйынчылыктарды чечүүPCR анализаторкоркунучтуу тапшырма болушу мүмкүн, бирок жалпы көйгөйлөрдү түшүнүү жана алардын чечимдери PCR тажрыйбаңызды кыйла өркүндөтө алат. Бул жалпы көйгөйлөрдү чечүү менен, изилдөөчүлөр ПККнын натыйжаларын өркүндөтүп, молекулярдык биология өтүнмөлөрүнө ишенимдүү натыйжаларды берет. Регаментиди кылдаттык менен тейлөө, кылдаттык менен тандоо жана реакция шарттарын оптимизациялоо ПК дисктик анализдөө үчүн баскычтар болуп саналат.