ПКРдин реакцияларындагы кийлигишүү факторлору

ПКО реакциясынын жүрүшүндө, кээ бир кийлигишүү факторлору көп кездешет.
ПКОнун өтө жогорку сезимталдыкынан улам, булгануу ПЦРдин натыйжаларына таасир эткен эң маанилүү факторлордун бири деп эсептелет жана жалган жакшы натыйжаларды берет деп эсептелет.
Терс терс натыйжага алып келген ар кандай булактар. Эгерде пКРдин аралашмасынын бир же бир нече маанилүү бөлүгү же амплитациялык реакцияга жол бербесе же ага кийлигишүүгө тоскоол болсо, диагностикалык прогноздук предметке тоскоол болот. Бул натыйжалуулукту азайтууга жана жалган терс натыйжаларга алып келиши мүмкүн.
Мекиндерден тышкары, максаттуу нуклеин кислотасынын ак нукурасын жоготуу, тандалма даярданганга чейин жеткирүү жана / же сактоо шарттарына байланыштуу болушу мүмкүн. Тактап айтканда, жогорку температура же жетишсиз сактоо клеткаларынын жана нуклеин кислоталарынын зыянга алып келиши мүмкүн. Клетка жана ткандардын белгилери жана парафиндин этели ДНКнын фрагменациясынын белгилүү себептери жана туруктуу көйгөй (1 жана 2-сандарды караңыз). Мындай учурларда, оптималдуу обочолонуу жана тазалоо жардам бербейт.

Сүрөт 1 | ДНКнын бүтүндүгүнө иммобилизациянын таасири
Агароза Гел электрофороистер көрсөткөндөй, парафиндик бөлүмдөрдөн обочолонгон ДНКнын сапаты бир кыйла өзгөрдү. Түзөтүүчү ыкмага жараша үзүндүлөрдүн ар кандай орточо ар кандай орточо көрсөткүчтөрүнүн узундугу бар. ДНК жергиликтүү тоңгон үлгүлөрдө жана бейтапканы бейтарап формалин менен бекитилгенде гана сакталган. ДНКнын олуттуу бир калыптанган формалин пайда болгон кислоталык бууин оңдоп-түзөөчү формалин пайда болгон. Калган үзүндү абдан кыскача.
Сол жактан фрагменттердин узундугу килобаза жуптарда (KBP) билдирилет

Сүрөт 2 | Нуклеин кислотасынын максаттарынын бүтүндүгүн жоготуу
(a) эки катардагы 3'-5 'ажырымы максаттуу ДНКдагы тыныгуу болот. ДНК синтезси кичинекей фрагментинде дагы деле болот. Бирок, ДНК фрагментинде муунтуу сайт жок болсо, сызыктуу амплификация гана болот. Эң ыңгайлуу учурларда, үзүндүлөр бири-бирин тыкыр өтүшү мүмкүн, бирок түшүмдүүлүктөр анча-мынча жана төмөндөгү аныктоо деңгээли болот.
(б) негизинен, басмырлоого жана тимидин дымер калыптанышына байланыштуу базаларды жоготуу Н-облигацияларынын санынын төмөндөшүнө алып келет жана ТМтин төмөндөшүнө алып келет. Узакка созулган жылыш мезгилинде праймерлер Матрица ДНКдан алыстап кетишет жана анчалык деле күчтүү шарттарда да, анализ болбойт.
(c) Чексиз тимин базалары ТТ Димер түзүлөт.
Көбүнчө молекулярдык диагностикада пайда болгон дагы бир жалпы көйгөй - фенол-хлороформду чыгарууга салыштырмалуу максаттуу нуклеин кислоталарынын оптималдуу бошотуусу болуп саналат. Өзгөчө учурларда, бул жалган негативдер менен байланышса болот. Клетка сыныктарын кайнатып жаткан лизис же ферменттик сиңирүү менен көп убакытты үнөмдөөгө болот, бирок бул ыкма көбүнчө нуклеин кислотасынын жетишсиздигинен улам пcRден төмөн сезгичтин натыйжасында пайда болот.

Амплизация учурунда полимеразалык иш-аракеттерди жасоо

Жалпысынан, ПКОнун натыйжаларына алып келген факторлорго алып келген бардык факторлорду сүрөттөө үчүн контейнер концепциясы катары колдонулган. Биохимиялык мааниде, мотферия ферменттин иши менен чектелген, б.а. ДНy POLYMAREAZE сайтынын жигердүү сайты менен өз ара аракеттенүү аркылуу (мисалы, MG2 + TAQ DNOLYMRARESE) өз ара аракеттенүү жолу менен субстрат-продукт-продукт конверсиясын төмөндөтөт.
Семестрдеги же ар кандай буферлердеги компоненттер ферменттерди түздөн-түз тыюу салат же анын мөөрлөрүн тузакка түшүрүшү мүмкүн, ошентип, полимеразду жанданып, өз кезегинде, төмөндөөгө же жалган терс терс натыйжаларга жол бербеши мүмкүн.
Бирок, реакциянын компоненттери менен нуклеин кислоталарынын ортосунда көптөгөн өз ара көздөгөн нуклеин кислоталар "ПКМБ ингихтору" деп да аталат. Клетканын бүтүндүгүнөн обочолонуу жана нуклеин кислотасы чыгарылып, тандалма жана анын айланасындагы чечимдердин ортосундагы өз ара аракеттенүү пайда болот. Мисалы, "Зындан", бир же эки тымызын ДНКны кымызсыз өз ара аракеттенбеген ДНКга байлап, пcR реакция идишине жеткен максаттардын санын азайтып, бир же эки эселенген ДНКны байлап, бөлүп-жаруу жана тазаланууга тоскоол болушу мүмкүн.
Жалпысынан, ПРОГРОГРАММАГА ИНИМИДЕРИ КЛИНИКАЛЫК СУЛУУЧУЛАР (Заара, гемоглобин жана гепариндин заара), диагностикалык сыноолор үчүн колдонулган, бул масштабдуу суюктуктар (заара, гемоглобин жана хепарин, гликоген, май, семиз, гликоген, май, семиздер жана компоненттер)

Бактериядан жана эукариоттук клеткалардан көбүрөөк кеңири таралган ПКМАКТАРГА КӨБҮРӨӨК Бактерия жана эукариоттук ДНК, мээлей жана пластиктер сыяктуу кыртыштын материалдардын жана лабораториялык жабдуулардын макромолесикаларынан. Казак мезгилинде же андан кийин нуклеин кислоталарды тазалоо, ПКО Ингибирлоруңузду алып салуу ыкмасы.
Бүгүнкү күндө ар кандай автоматташтырылган экстракциялоо жабдуулары көптөгөн кол менен протоколдорду алмаштыра алышат, бирок 100% Максаттарды калыбына келтирүү жана / же тазалоо эч качан жетишилген эмес. Потенциалдуу ингибиторлор дагы эле тазаланган нуклеин кислоталарында болушу мүмкүн же буга чейин күчүнө кириши мүмкүн. Ар кандай стратегиялыктар ингибирлоруңуздун таасирин азайтуу үчүн бар. Тийиштүү полимеразаны тандоо ингибитордук иш-аракеттерге олуттуу таасирин тийгизиши мүмкүн. ПКРдин тыюу салууну азайтуу үчүн башка далилденген ыкмалар полимеразалык концентрацияны жогорулатуу же BSA сыяктуу кош кошулмаларды колдонуу.
ПЦр реакцияларды ички процесстин сапатын контролдоону (IPC) колдонуу менен көрсөтүлүшү мүмкүн.
Этанол, Эдта, Четаб, Лик, Гускан, Сод, Иопропанол жана фенол, бул нуклеин кислотасынан, изопропанол жана феноллерден, изопропанол жана фенол. Алардын концентрациясына жараша, алар ПККны активдештириши же тоскоол кылышы мүмкүн.